ΥΑΛΟΠΟΙΗΣΗ ( VITRIFICATION)
Περίπου το 20% των απογόνων που γεννιούνται στον κόσμο μέσω της υποβοηθούμενης αναπαραγωγής (IVF) κρυοσυντήρηση ωαρίων και εμβρύων.
Οι κρύσταλλοι πάγου δεν θα έπρεπε ποτέ να επιτρέπεται να εμφανίζονται και να μεγαλώνουν στο εσωτερικό των κυττάρων του εμβρύου και γι’αυτό έχουν αναπτυχθεί 2 βασικές προσεγγίσεις:
Α)Η ελεγχόμενη σταδιακή κατάψυξη
Β)Το πρωτόκολλο της υαλοποίησης
Βασικές αρχές της κρυοσυντήρησης
1.Αρχική έκθεση του κρυοπροστατευτικού (το εσωκυττάριο νερό πρέπει να έχει
αφαιρεθεί).
2.Πάγωμα* (με αργό/γρήγορο ρυθμό)σε υπό το μηδέν θερμοκρασία(-196οC).
3.Αποθήκευση
4.Απόψυξη ή ζέσταμα(σταδιακά ή γρήγορα).
5.Αραίωση και αφαίρεση του κρυοπροστατευτικού παράγοντα και αντικατάστασή του από το κυτταρικό και εσωκυττάριο υγρό σε ακριβή αναλογία.
6.Επιστροφή σε ένα φυσιολογικό περιβάλλον.
*Τα έμβρυα μπορούν να κρυοσυντηρηθούν ,όντας με το να γίνουν κρύα είτε αργά(0.3oC/min) είτε γρήγορα.(10,000oC/min).
Η υαλοποίηση δεν είναι μια καινούρια τεχνική και εφαρμόζεται ευρέως σε άλλα μέρη του κόσμου μόνο που τώρα κερδίζει δημοτικότητα στην Δύση.
Η υαλοποίηση περιγράφθηκε πρώτα σαν μια δυναμική εναλλαγή της σταδιακής κατάψυξης το 1985. Αφού η βλάβη στα ωάρια από το ρίγος είναι χρονικά εξαρτώμενη, το λογικό είναι να εμποδιστεί ο σχηματισμός πάγου και η βλάβη από το κρύωμα σε αρκετά γρήγορο ρυθμό να στερεοποιήσει το εσωκυττάριο νερό πριν αυτό κρυσταλλοποιηθεί.
Τα ανθρώπινα ωάρια έχουν υψηλή περιεκτικότητα σε νερό και συνεπώς είναι υπερβολικά εύθραυστα και ευαίσθητα σε όλες τις μεθόδους κατάψυξης. Οι μέθοδοι της ελεγχόμενης σταδιακής κατάψυξης δεν είναι πάντα επιτυχείς, διότι επιτρέπουν τον σχηματισμό μερικών ενδοκυτταρικών κρυστάλλων πάγου ,οι οποίοι δημιουργούν μερική καταστροφή στα έμβρυα και σοβαρή καταστροφή στα περισσότερα ωάρια καθιστώντας τα μη χρήσιμα.
Οι κρύσταλλοι πάγου δεν θα έπρεπε ποτέ να επιτρέπεται να εμφανίζονται και να μεγαλώνουν στο εσωτερικό των κυττάρων του εμβρύου και γι’αυτό έχουν αναπτυχθεί 2 βασικές προσεγγίσεις:
Α)Η ελεγχόμενη σταδιακή κατάψυξη
Β)Το πρωτόκολλο της υαλοποίησης
Βασικές αρχές της κρυοσυντήρησης
1.Αρχική έκθεση του κρυοπροστατευτικού (το εσωκυττάριο νερό πρέπει να έχει
αφαιρεθεί).
2.Πάγωμα* (με αργό/γρήγορο ρυθμό)σε υπό το μηδέν θερμοκρασία(-196οC).
3.Αποθήκευση
4.Απόψυξη ή ζέσταμα(σταδιακά ή γρήγορα).
5.Αραίωση και αφαίρεση του κρυοπροστατευτικού παράγοντα και αντικατάστασή του από το κυτταρικό και εσωκυττάριο υγρό σε ακριβή αναλογία.
6.Επιστροφή σε ένα φυσιολογικό περιβάλλον.
*Τα έμβρυα μπορούν να κρυοσυντηρηθούν ,όντας με το να γίνουν κρύα είτε αργά(0.3oC/min) είτε γρήγορα.(10,000oC/min).
Η υαλοποίηση δεν είναι μια καινούρια τεχνική και εφαρμόζεται ευρέως σε άλλα μέρη του κόσμου μόνο που τώρα κερδίζει δημοτικότητα στην Δύση.
Η υαλοποίηση περιγράφθηκε πρώτα σαν μια δυναμική εναλλαγή της σταδιακής κατάψυξης το 1985. Αφού η βλάβη στα ωάρια από το ρίγος είναι χρονικά εξαρτώμενη, το λογικό είναι να εμποδιστεί ο σχηματισμός πάγου και η βλάβη από το κρύωμα σε αρκετά γρήγορο ρυθμό να στερεοποιήσει το εσωκυττάριο νερό πριν αυτό κρυσταλλοποιηθεί.
Τα ανθρώπινα ωάρια έχουν υψηλή περιεκτικότητα σε νερό και συνεπώς είναι υπερβολικά εύθραυστα και ευαίσθητα σε όλες τις μεθόδους κατάψυξης. Οι μέθοδοι της ελεγχόμενης σταδιακής κατάψυξης δεν είναι πάντα επιτυχείς, διότι επιτρέπουν τον σχηματισμό μερικών ενδοκυτταρικών κρυστάλλων πάγου ,οι οποίοι δημιουργούν μερική καταστροφή στα έμβρυα και σοβαρή καταστροφή στα περισσότερα ωάρια καθιστώντας τα μη χρήσιμα.
Εντούτις, η υαλοποίηση αποφεύγει την καταστροφή που προκαλείται από τον σχηματισμό κρυστάλλων στο εσωτερικό των κυττάρων , αυξάνοντας δραματικά το βαθμό επιβίωσής τους.
Υγιή παιδιά έχουν ήδη γεννηθεί μετά από γονιμοποίηση από υαλοποιημένα ωάρια.
Άλλο πλεονέκτημα της υαλοποίησης είναι ότι είναι δυνατό να παρατηρεί κάποιος κάθε στάδιό της μέσα στο εργαστήριο.
Θ. Μαυρέλη
ΜΗΤΕΡΑ
Διάβασε περισσότερα για την κατάψυξη στην υποβοηθούμενη αναπαραγωγή…….
Comments